本发明提供了一种基于DNA分子标记的虾夷扇贝活体性别鉴定方法。其是通过活体获取虾夷扇贝少量鳃丝,提取DNA,PCR扩增性别特异性DNA分子标记,电泳检测PCR产物中是否存在目的条带,从而实现扇贝活体性别鉴定。本发明提供的性别特异性DNA分子标记为雌性所特有,其核苷酸片段序列为SEQ ID NO:1。采用PCR引物扩增此分子标记,根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定虾夷扇贝的性别,扩增出1859bp特异性条带的样品为雌性,没有该条带的为雄性。该方法可以实现虾夷扇贝活体性别鉴定,方法简单,结果准确,有助于加快虾夷扇贝良种培育进程。